杉木桩自毒研究材料与方法

2021-09-16

杉木桩自毒研究材料与方法

实验室模拟野外环境,通过测定杉木桩不同分解阶段分解率及对不同分解阶段化感 物质的生物活性评价,从而对杉木自身化感作用进行更深入的研究。

1材料来源及处理

从杉木连栽二代人工林当年采伐迹地上选取尚未分解的杉木桩,带回实验室备用。 与杉木桩同期、同一地点釆集的杉木连栽二代人工林山坡上部取20-60 cm土壤与撩荒 迹地60-100 cm黄心土 1:5的比例混合作为腐解土,分别称取腐解土和杉木桩各250g 250 g,充分混合,装入腐解桶内,整个腐解过程在室内进行,腐解期间,每半个月浇清 1次,每次100mlo杉木桩腐解解时间定为12个月,每3个月取次样,测定其腐解速率 并用有机溶剂浸提法提取不同腐解阶段桩化感物质。

2分解率的测定

3个月取分解桶中尚未腐解的的杉木桩样品,40C烘干至恒重,计算残留率和失 重率.

残留率=Xt/Xo xlOO% 失重率=1-残留率

式中Xo为杉木桩的初始重量,Xt为分解时间t时的杉木桩剩余重量。

3化感物质的浸提及分离

釆用有机溶剂无水乙醇、丙酮、水(VV:V=2:2:1)混合浸提不同腐解阶段残留的杉木桩化感物质,浸提时间为3x2 d,浸提液过滤后经高速旋转离心机3500r/min离心除去 残渣。离心后的浸提液先经旋转蒸发(温度45)除去提取剂后,将所得化感物质再用丙 酮萃取分离,得溶于丙酮的弱极性化感物质和不溶于丙酮的极性化感物质,然后用真空 减压法完全脱萃取剂。

4生物检测

生物检测是以杉木种子为材料。整个发芽实验在人工气候箱中进行,温度控制在 (27±2)C,湿度控制在(60±2)%°芽床由直径为9cm的定量滤纸和培养皿构成。试验前, 先将培养皿洗净,并置于120°C的烘箱中消毒2 h人工气候箱用1%的福尔马林溶液擦洗, 闷2-3 d使用。种子先用清水漂洗除去空粒,再用0.15%的福尔马林溶液浸泡30 min, 0.5h灭菌后,置于45C蒸馋水自然冷却,浸种24砒每个培养皿中放置100粒种子,对照 用乙醇(IxlO^g-f1),每个处理重复4次,在每个培养皿中每天加入等量的对应实验号 的添加液。安置发芽的当天为第1天,第3d开始观察、统计发芽粒数,并按记录逐次登 记,第15 d测其发芽率、发芽势、胚根长、胚轴长、鲜物质重量、干物质重量。

5实验添加液的配制

从浓缩分离所得的每种浸提物中分别称取0.04 g化感物质,用2 ml的无水乙醇溶解 后,加入198 ml的蒸馋水配制成浓度为200mg-L4的待用母液,然后分别稀释成浓度为 100 mgI?50 mg-f1 (各溶液中所含无水乙醇浓度均为1:100)的试验添加液,对照分别 lxK/mgL的无水乙醇溶液(以下简称对照I)和蒸馅水(以下简称对照II)

6数据处理

将试验所得的的全部数据输入计算机,计算绝对发芽率、绝对发芽势、胚根长、胚 轴长、鲜物质量和干物质量。并釆用DPS统计分析软件对各发芽指标进行方差分析和LSD 多重比较。

发芽率和发芽势均为反映林木种子品质的重要指标。前者反映种子的发芽能力,后 者反映种子发芽速度快慢。由于杉木种子的涩粒较多,釆用绝对发芽率和绝对发芽势进 行生物检测。

绝对发芽率=〔总发芽数/(100一涩粒数x100%

绝对发芽势=[发芽最多那一天发芽的总粒数/(100-涩粒数)]X100%