杉木桩自毒研究材料与方法
杉木桩自毒研究材料与方法
实验室模拟野外环境，通过测定杉木桩不同分解阶段分解率及对不同分解阶段化感 物质的生物活性评价，从而对杉木自身化感作用进行更深入的研究。
1材料来源及处理
从杉木连栽二代人工林当年采伐迹地上选取尚未分解的杉木桩，带回实验室备用。 与杉木桩同期、同一地点釆集的杉木连栽二代人工林山坡上部取20-60 cm土壤与撩荒 迹地60-100 cm黄心土 1:5的比例混合作为腐解土，分别称取腐解土和杉木桩各250。g和 250 g,充分混合，装入腐解桶内，整个腐解过程在室内进行，腐解期间，每半个月浇清 水1次，每次100mlo杉木桩腐解解时间定为12个月，每3个月取次样，测定其腐解速率 并用有机溶剂浸提法提取不同腐解阶段桩化感物质。
2分解率的测定
每3个月取分解桶中尚未腐解的的杉木桩样品，40C烘干至恒重，计算残留率和失 重率.
残留率=Xt/Xo xlOO% 失重率=1-残留率
式中Xo为杉木桩的初始重量，Xt为分解时间t时的杉木桩剩余重量。
3化感物质的浸提及分离
釆用有机溶剂无水乙醇、丙酮、水(V：V:V=2:2:1)混合浸提不同腐解阶段残留的杉木桩化感物质，浸提时间为3x2 d,浸提液过滤后经高速旋转离心机3500r/min离心除去 残渣。离心后的浸提液先经旋转蒸发(温度45笆)除去提取剂后，将所得化感物质再用丙 酮萃取分离，得溶于丙酮的弱极性化感物质和不溶于丙酮的极性化感物质，然后用真空 减压法完全脱萃取剂。
4生物检测
生物检测是以杉木种子为材料。整个发芽实验在人工气候箱中进行，温度控制在 (27±2)C,湿度控制在(60±2)%°芽床由直径为9cm的定量滤纸和培养皿构成。试验前, 先将培养皿洗净,并置于120°C的烘箱中消毒2 h；人工气候箱用1%的福尔马林溶液擦洗, 闷2-3 d使用。种子先用清水漂洗除去空粒，再用0.15%的福尔马林溶液浸泡30 min,闷 0.5h灭菌后，置于45C蒸馋水自然冷却，浸种24砒每个培养皿中放置100粒种子，对照 用乙醇(IxlO^g-f1),每个处理重复4次，在每个培养皿中每天加入等量的对应实验号 的添加液。安置发芽的当天为第1天，第3d开始观察、统计发芽粒数，并按记录逐次登 记，第15 d测其发芽率、发芽势、胚根长、胚轴长、鲜物质重量、干物质重量。
5实验添加液的配制
从浓缩分离所得的每种浸提物中分别称取0.04 g化感物质，用2 ml的无水乙醇溶解 后，加入198 ml的蒸馋水配制成浓度为200mg-L4的待用母液，然后分别稀释成浓度为 100 mg・I?和50 mg-f1 （各溶液中所含无水乙醇浓度均为1:100）的试验添加液，对照分别 为lxK/mgL】的无水乙醇溶液（以下简称对照I）和蒸馅水（以下简称对照II）。
6数据处理
将试验所得的的全部数据输入计算机，计算绝对发芽率、绝对发芽势、胚根长、胚 轴长、鲜物质量和干物质量。并釆用DPS统计分析软件对各发芽指标进行方差分析和LSD 多重比较。
发芽率和发芽势均为反映林木种子品质的重要指标。前者反映种子的发芽能力，后 者反映种子发芽速度快慢。由于杉木种子的涩粒较多，釆用绝对发芽率和绝对发芽势进 行生物检测。
绝对发芽率=〔总发芽数/（100一涩粒数）x100%
绝对发芽势=［发芽最多那一天发芽的总粒数/（100-涩粒数）］X100%
